Caracterizaci?n gen?tica y fenot?pica de aislados chilenos de Botrytis cinerea de diferente grado de sensibilidad a Boscalid
- Authors
- Rom?n Ramos, Andrea Elizabeth
- Format
- MasterThesis
- Status
- publishedVersion
- Description
Botrytis cinerea produce importantes p?rdidas en uva de mesa en Chile. En el control qu?mico de este pat?geno se utiliza entre otras mol?culas a boscalid, carboxamida que act?a inhibiendo la enzima succinato deshidrogenasa. En aislados de Botrytis recolectados de cultivos sometidos a un uso intensivo del fungicida, se ha demostrado la asociaci?n entre la p?rdida de sensibilidad con mutaciones en el gen sdhB, en donde se han identificado las mutaciones P225F/L/T y N230I asociadas a aislados resistentes y en mayor frecuencia las mutaciones H272R/Y/L asociadas a aislados resistentes y moderadamente resistentes. Durante las ?ltimas dos temporadas (2011-2012 y 2012-2013), en la zona Central de Chile, se ha reportado una baja sensibilidad a boscalid. El objetivo de la presente investigaci?n fue determinar la presencia de mutaciones en el gen sdhB en aislados chilenos de Botrytis cinerea de distinto nivel de sensibilidad a boscalid. Con este prop?sito, 50 aislados monoconidiales fueron caracterizados gen?tica y fenot?picamente. Para la caracterizaci?n fenot?pica se verific? la sensibilidad a boscalid mediante evaluaci?n del comportamiento de germinaci?n conidial, determin?ndose 4 categor?as seg?n valores EC50: Sensible (S) (>0,05-1,37?g.mL-1), Levemente Resistente (LR)(1,38-7,80?g.mL-1), Moderadamente Resistente(MR)(7,81-50?g.mL-1) y Resistente (R) (>50?g.mL-1). Aislados R y MR con mutaciones se compararon con sensibles, seg?n par?metros como: crecimiento miceliar, esporulaci?n, sensibilidad osm?tica, capacidad formadora de esclerocios y virulencia. La detecci?n de mutaciones se realiz? mediante la t?cnica PCR-PIRA (Primer-Introduced Restriction Enzyme Analyses) y el uso de partidores espec?ficos H272Y/R-fw y H272-rev, cuyos productos fueron digeridos con las enzimas de restricci?n EcoRV y HhaI respectivamente. Los aislados de Botrytis cinerea mostraron niveles de sensibilidad a boscalid variables entre 0,13 ?g.mL-1 (S) y 1,1*109 ?g.mL-1 (R). La utilizaci?n del PCR-PIRA, permiti? identificar las mutaciones H272Y/R en el gen sdhB que resultaron ser inespec?ficas de un determinado nivel de sensibilidad a boscalid. De acuerdo a los par?metros de adaptabilidad evaluados tales como crecimiento miceliar, capacidad formadora de esclerocios y esporulaci?n de aislados resistentes con mutaciones H272Y/R respecto de los sensibles fueron significativamente diferentes (p<0,05), lo cual implicar?a que las mutaciones detectadas y asociadas a la resistencia a boscalid generar?an un costo metab?lico en los aislados de Botrytis.
- Publication Year
- 2014
- Language
- spa
- Topic
- BIOLOG?A MOLECULAR
FITOPATOLOG?A
RESISTENCIA DE PAT?GENOS
MANEJO DE ENFERMEDADES
- Repository
- Repositorio SENESCYT
- Rights
- openAccess
- License
- openAccess